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Revista toxicológica en línea

Métodos de conservación de cepas de Salmonella typhimurium utilizadas en el ensayo de Ames

nº19 [ago - septiembre 2009 ] Retel
16/08/2009
Daniel Francisco Arencibia Arrebola1, Luis Alfredo Rosario Fernández2.
1 Doctor en Medicina Veterinaria y Zootecnia,
2 Licenciado en Microbiología.
Centro de Química Farmacéutica (CQF), Calle 200 y Avenida 21, Atabey, Playa, Apartado Postal 16042, Ciudad de La Habana, Cuba.
Correspondencia a: Daniel Francisco Arencibia Arrebola.
Email: [email protected]
Métodos de conservación de cepas de Salmonella typhimurium utilizadas en el ensayo de Ames

Resumen

En los estudios de genotoxicidad potencial de una sustancia se deben incluir ensayos que permitan detectar daño genético, tanto cromosómico como génico, en células somáticas y germinales, para lo cual existen métodos “in vitro” estandarizados en microorganismos. En el ensayo de ames se utilizan cepas de Salmonella typhimurium, construidas por ingeniería genética, capaces de detectar compuestos que causan mutaciones génicas. La mayor dificultad del trabajo con estas cepas es la disminución de la calidad en cuanto a la pérdida total o parcial de los marcadores fenotípicos, por ser susceptibles a los cambios de temperatura. El objetivo de este trabajo es profundizar sobre el tema de cómo conservar estas cepas eficientemente, siendo evaluadas mediante las pruebas fenotípicas como parámetro de calidad del proceso. Se hace alusión a los métodos generales de conservación, utilidad del ensayo de ames, evaluaciones a incluir en las pruebas fenotípicas y su utilidad para definir el método más eficaz de conservación. Los métodos más eficaces de conservación lo constituyen la liofilización en primer lugar y la congelación a -80 ºC como método alternativo para un corto periodo de tiempo, las pruebas fenotípicas utilizadas como parámetros de calidad nos permiten definir cual es el método ideal de conservación. Bajo nuestras condiciones experimentales, para el caso de las cepas TA 98, 100 y 102 evaluadas durante 3 años, el mejor método de conservación es la liofilización con mantenimiento a 4ºC, sin modificaciones significativas en el efecto mutación his y la frecuencia espontánea de reversiones.

Palabras clave:
Conservar, Salmonella typhimurium, ensayo de ames, pruebas fenotípicas, TA 98, TA 100, TA 102.

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Abstract

Conservation Methods of Salmonella typhimurium strains used in the Ames test.
The genotoxicity potential studies of a substance should be include the assays that allow detecting genetic, Chromosomal and genic damage, in somatic and germinal cells, for that which exist in vitro standardized methods in microorganisms. Ames test are used Salmonella typhimurium strains, built by genetic engineering, able to detect compound that cause genics mutations. The biggest problems in the strains work is the quality decrease of the total or partial loss of the phenotypic markers, to be susceptible to the temperature changes. The aim of this work is to deepen on the topic of how to conserve these strains efficiently, being evaluated by means of the phenotypic tests like parameter of process quality. We made allusion about general methods of conservation, ames test utility, evaluations that to include in the phenotypic tests and it’s utility to define the most effective conservation method. We conclude that the most effective conservation methods constitute in the first place the lyophilization and the -80 ºC freezing like alternative method for a short time period, the phenotypic tests used as parameters of quality allow to be defined which is the ideal conservation method. Under our experimental conditions, in TA 98, 100 and 102 strains evaluated during 3 years, the best conservation method is the lyophilization with maintenance at 4ºC, without significant modifications in his mutation effect and spontaneous reversions frequency.

Key words: Conserve, Salmonella typhimurium, ames test, fenotipic tests, TA 98, TA 100, TA 102.

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